液氮超低溫保藏**是將菌種密封在有保護劑的安瓿管內，經控制速度凍結后，在-150℃～-196℃液態氮超低溫罐中保藏。

   1.菌種制備

   保藏孢子時，取孢子制成懸液，加入保護劑，裝入無菌安瓿管內。保存菌絲體時，用液體振蕩法培養菌絲球，或用平板培養菌絲體，也可用麥粒菌種。取適量放入無菌的裝有保護劑的安瓿管內。

   2.安瓿管

   制作安瓿管的玻璃，要具有經受溫度突變而不破裂、容易用火焰熔封管口、恢復培養時容易打開的特點。一般采用硼硅玻璃，管的大小根據需要而定，通常是75毫米×10毫米或能容1.2毫升液體的安瓿瓶比較合適。選好安瓿管后，每管加進0.8毫米保護劑，塞上棉塞，在1千克/平方厘米壓力下滅菌15分鐘，供凍結瓊脂菌絲片或麥粒菌種用。如凍結孢子懸液時，則空管滅菌。

   3.保護劑

   用體積比10%甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液作保護劑。

   4.凍結保藏

   將上述準備好的菌種以無菌操作移入加有保護劑的安瓿管中，用火焰將安瓿管上部熔封，浸在水中檢查有無漏氣。然后將封口的安瓿管放在慢速凍結器內，控制凍結速度，一般每一分鐘降低1℃，使樣品逐步均勻地凍結到－40℃。－40℃以下的凍結速度，可不用控制而迅速下降。安瓿管凍結后，立即放入山立牌液氮罐中。罐內的氣相溫度為－150℃，液體溫度為－196℃。

   5.恢復培養

   需要使用保藏菌種時，將安瓿管從液氮罐中取出，立即放入33～40℃的水浴中振蕩至管內凍結物全部融解，開啟安瓿管，將管內菌種接入適宜培養基培養即可。

   液氮超低溫保藏是目前長期保藏菌種的****的一種方法，用它進行保藏各類食用菌的菌種都獲得了滿意的結果。

   早前常用的液氮罐的容積有10升、35升兩種，也有更大的，如美國菌種保藏委員會（ATCC）使用的容積達250升和650升。常用的備用液氮罐容積為10～35升，也有100升的。由于液氮來源困難、液氮罐

設備費用大，目前這種保藏方法還未廣泛普及使用。現在以前的液氮超低溫保存設備和保存成本已經大大降低了，有關液氮超低溫保存的相關問題山立低溫提供免費咨詢，我公司提供300升 500升800升  1800升  現貨供應選擇歡迎來電